产气荚膜梭菌全菌蛋白免疫学分析

摘要

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,C.perfringens)又称为魏氏梭菌(Clostridium welchii),是一种革兰氏阳性厌氧芽孢杆菌,是人和动物肠道常在菌.该菌在繁殖过程中能产生多种具有致病作用的外毒素和酶,目前发现的有ɑ、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν和NetB毒素以及许多透明质酸酶和唾液酸酶.其中ɑ、β、ε和ι是主要的致死毒素,依据产生的主要致死性毒素可将此菌分为A、B、C、D和E5个型.其中,A型产气荚膜梭菌产生ɑ毒素,因其引起的鸡坏死性肠炎(Necroticenteritis,NE)对全球养殖业造成了重大经济损失,而成为研究的热点.本次研究通过免疫蛋白质组学鉴定蛋白中的免疫原性蛋白。利用C.perfringens标准株ATCC13124全菌多抗，双向电泳识别出34个具有免疫原性的蛋白点.选取16胶点一式两份进行MALDI-TOF-MS和PMF分析，总共14种免疫原性蛋白被测出。除α毒素、免疫原性蛋白延伸因子Tu和丙酮酸铁氧化还原酶外，其他均为新鉴定出的免疫性抗原，大部分的免疫原性蛋白均位于外膜和细胞质中，并参与细胞代谢。本次研究选取了半胱氨酸合成酶、假定转酮酶、乙醇脱氢酶和嘌呤核苷磷酸化酶四个免疫原性蛋白，构建原核质粒并进行了蛋白表达，以纯化蛋白为抗原制备了多抗，同时构建了四种蛋白的真核质粒，以真核质粒进行动物保护试验，结果表明四种蛋白能在不同程度上对C.perfringens的攻击提供保护，另外，制备的多克隆抗体能特异性结合C.perfringens菌体蛋白，可用于血清学检测，对产气荚膜梭菌的临床检测及致病机制研究均具有一定意义。