大豆遗传转化过程中种传真菌污染的控制

摘要

大豆组织培养是其遗传转化的主要技术构成之一,组织培养中最基本也最关键的要求是无菌。由于大豆转化的起始外植体为萌动1d的种子,此时被污染的种子尚无任何表现症状,而农杆菌侵染又是在液体中进行,一粒种子的污染可能导致整个实验的失败,因此,大豆种子的消毒在遗传转化中显得更为关键。国内外通用的方法将污染的器皿丢弃,然而在转化后期扔掉已长大的组培苗十分可惜。本研究对来自不同生态区的品种进行氯气消毒后发现,细菌污染经氯气消毒后可以完全除去。主要污染源为真菌，主要种类为镰抱菌、拟茎点霉种腐菌和黑斑菌，这些病菌主要以菌丝形式均可随种子传播，其污染特点为病原初期生长缓慢，形成明显菌丝约需3~5d时间，2~3d后菌丝迅速菱延至整个培养器皿，抗生素对其无效，利用真菌在前期生长较慢的特点，大豆共培3~5d后，将外植体转入含有菌抑(组培专用真菌抑制剂)的培养基中进行抗性芽的诱导、伸长和生根，对真菌抑制效果达到99%以上，且不与baste、潮霉素等筛选剂发生拮抗作用，对个别污染的外植体挑出即可，不必丢弃整皿组培苗，有效提高了转化的效率。