鸡黄病毒RT-PCR检测方法的建立

摘要

为建立鸡黄病毒(CFV)分子生物学诊断方法,本研究将虫媒介黄病毒基因3’末端通用引物EMF1/VD8作为鉴别引物,以CFV分离株CJD-05为模板,建立了检测CFV的RT-PCR方法.RT-PCR扩增产物测序结果显示,其扩增片段为708bp,而该方法对鸡传染性支气管炎病毒、番鸭呼肠孤病毒、禽呼肠孤病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、新城疫病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽流感病毒H9亚型和鸡减蛋综合征病毒等病原核酸的扩增结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性.扩增的特异性片段与GenBank中CFV、鸭黄病毒(DFV)、鹅黄病毒(GFV)序列同源性达到100％、98％、99％.对参考病毒进行梯度稀释检测,该方法检测CFV的敏感度可达10-3TCID50/0.1mL.利用所建立的RT-PCR方法对2009年福建省部分鸡场的112份临床样品进行检测,结果37份为鸡黄病毒阳性.本研究建立的PCR方法可以作为鸡黄病毒在临床检测和分子流行病学调查上的一种诊断技术.