TaqMan实时荧光定量PCR检测PCV2方法的建立

摘要

本研究以猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白ORF2为目的基因，设计合成特异性引物和探针。PCR扩增得到目的基因，并克隆到pMD18-T载体，筛选得到标准阳性质粒。通过对荧光定量PCR反应条件的优化，建立了实时TaqMan荧光定量PCR检测PCV2的方法。试验结果表明，该方法特异性强，对猪伪狂犬病毒(PRV)，猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，猪瘟病毒(CSFV)等猪常见病原的检测结果均为阴性；与普通PCR方法相比，其敏感性高出100倍，可达100拷贝/μL；对临床样品的检测证明，该方法可有效检测出淋巴结，肺脏等组织中的PCV2病毒。