狂犬病病毒攻毒犬唾液排毒及病毒在体内的分布研究

摘要

狂犬病由高度嗜神经性的狂犬病病毒引起，带毒动物咬伤或破损皮肤被带毒动物舔舐是狂犬病传播的主要途径。一旦发病，病毒从大脑传播到唾液腺，可在唾液腺中大量增殖，并以唾液的形式排出。然而，犬唾液排毒的特点和规律，以及感染犬组织器官中病毒的分布情况报道甚少。为此，本实验选取了两株狂犬病病毒街毒SDJN02(牛源)和SXTYD01(犬源)对比格犬进行了攻毒实验，以探索感染犬唾液排毒的特点和病毒在宿主组织器官的分布情况。将SDJN02和SXTYD01分别对5条比格犬进行双侧咬肌攻毒，攻毒24小时后每天观察其临床症状并采集唾液拭子，上下午各采集一次，间隔约为6小时。攻毒犬发病死亡后采集大脑、各段脊髓(延髓、颈椎、胸椎、腰椎和尾椎)、颌下淋巴结、颌下腺、眶腺、舌肌、咬肌(攻毒部位)、心、肝、脾、肺、肾和十二指肠道内容物。利用荧光定量PCR和RT-PCR对唾液样品及死亡犬的各组织器官进行病毒检测。临床观察结果表明SDJN02感染后的潜伏期为5-11天，而SXTYD01感染后的潜伏期略长，为12-18天。十条攻毒发病犬中有1条犬没有发病但出现较高的中和抗体反应，其余9条犬均出现狂犬病的典型症状，而且死亡，病程为1～6天。二个毒株出现的症状略有差异，SDJN02多望空哀鸣、躯体和头抖动、唾液分泌多。而SXTYD01多沉郁、具有攻击性。病毒检测及分离鉴定结果表明，攻毒后未发病犬中枢神经及各脏器和唾液均未检出病毒，其余9条发病犬的脑及脊髓各段神经组织均有病毒。唾液检测结果意外发现9条攻毒发病犬中只有2条发病犬出现唾液排毒，其余7条犬攻毒后直至死亡其唾液均不排毒，这2条发病犬从潜伏期(最早于攻毒后第6天)就开始唾液排毒，排毒均有明显的间歇性，直至死亡。九条发病死亡犬中除1条犬未做器官检测外，其余8条犬的组织器官均进行了病毒检测。结果表明8条犬的咬肌和舌肌中均检出病毒，其中6条犬唾液腺组织检出病毒(包括2条唾液排毒犬)。颌下淋巴结和内脏器官病毒检测结果表明，8条病犬中有3条犬的内脏器官和淋巴结检出病毒，其中1条犬肠道内容物检出病毒。本研究对进一步认识狂犬病病毒感染犬唾液排毒规律和病毒在体内分布特点具有重要意义。