大豆抗原蛋白β-conglycinin抗酶解肽的分离纯化及其免疫活性鉴定

摘要

β-conglycinin是引起动物过敏反应的主要致敏原之一，经消化酶降解后仍有具有免疫活性的抗酶解物质存在，目前它对动物的致敏机理和强度还没有确切定论。本试验旨在分离纯化出β-conglycinin抗酶解肽，为后续的体外试验提供刺激源，从而为研究抗酶解肽对机体的致敏作用及机制提供必备的基础保障。试验通过模拟体外环境，利用胃蛋白酶、胰蛋白酶消化β-conglycinin，分析β—conglycinin中主要的抗酶解肽段，并用β-conglycinin致敏的兔血清免疫印迹试验检测抗酶解肽段的免疫活性，利用凝胶层析技术分离纯化β—conglycinin抗酶解肽。结果显示：β-conglycinin在胃蛋白酶、胰蛋白酶的连续消化下产生大量抗酶解的肽段，其中有三条主要的抗酶解肽段，分子量分别约为52kDa、30kDa，25kDa。52kDa含量相对较高，且均具有免疫活性。酶解产物经葡聚糖G-100凝胶层析分离纯化后，得到分子量为52kDa的抗酶解肽段纯品。