鹦鹉热嗜衣原体Ⅲ型分泌系统效应蛋白的筛选鉴定及致病作用的探究

摘要

本研究采用Effective T3和BPBAac生物信息学软件对Cps 942个编码基因进行预测筛选T3SS效应蛋白，选取12个基因提取Cps6BC标准株DNA模板，PCR扩增预测CpsT3SS效应蛋白编码基因，将其亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中构建重组质粒pGEX-6P-1/目的片段，经PCR、测序鉴定后将其转化至表达宿主菌E. coli BL21中，进行IPTG诱导表达获得可溶性蛋白。GST纯化树脂纯化重组蛋白，然后经皮下注入免疫BALB/c小鼠，获得多克隆抗体，并以其为一抗，应用间接免疫荧光(IFA)检测预测蛋白在感染细胞的定位情况，以筛选Cpn分泌性蛋白。其中cpsit_844,cpsit_0846在感染后12h即可见分泌，并且cpsit_0844,cpsit_0846与沙眼衣原体、肺炎嗜衣原体和鼠型衣原体抗血清无交叉反应，提示其为cps特异分泌蛋白。