腾冲嗜热芽胞杆菌中丙氨酸消旋酶的酶学特性表征

摘要

目的：克隆、表达及纯化腾冲嗜热芽孢杆菌MB4中丙氨酸消旋酶，表征其酶学特性，探索酶蛋白活性通道中不保守氨基酸位点的作用机制。方法：利用PCR技术、分子筛层析法和动态光散射法及酶标仪及HPLC法，对相应物质进行检测分析。结果及结论：实验成功克隆、表达、纯化获得了腾冲嗜热菌MB4中一个丙氨酸消旋酶，酶学特性分析说明该酶蛋白是以二聚合形式存在、PLP辅酶依赖型、嗜热丙氨酸消旋酶；定点突变发现活性通道内层两个不保守氨基酸位点的经基基团可能与底物定位有关，因而突变后导致酶蛋白活性急剧下降。