乳酸脱氢酶(LDH)的重组表达纯化及其检验标准品应用研究

摘要

目的：利用基因工程制备乳酸脱氢酶(LDH)重组蛋白,为临床实验室LDH的检测提供更为稳定可靠,方便快捷的质控标准品.方法：将LDH编码基因LDHA克隆至表达载体pRSFDuet-1,选择合适条件,诱导该带His标签的LDH重组蛋白在宿主菌E.coli BL21(DE3)中可溶性表达并纯化;用Bradford蛋白质定量试剂盒及Olympus AU5400全自动生化分析仪分别检测LDH重组蛋白的浓度及活性.结果：成功构建了重组表达质粒LDH-pRSFDuet-1,酶切测序均鉴定正确并转化入E.coli BL21(DE3)后获得可溶性高表达LDH的工程菌株.用镍柱和交联葡聚糖G50分子筛纯化后可获得纯度大于95％的LDH蛋白,Olympus AU5400全自动生化分析仪检测其活性为80000U/L.结论：与传统的标准品制备方法相比,运用分子克隆及基因重组技术可在大肠杆菌原核表达系 统中稳定可溶性表达浓度(活性)较高的LDH蛋白,为临床实验室提供更为方便快捷、质优价廉的质控标准品提供了理论基础和技术保障.