大鼠EPO重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的:构建大鼠促红细胞生成素(EPO)重组腺病毒质粒,为进一步深入研究EPO在大鼠内耳螺旋神经元神经保护中的作用奠定基础.方法:全基因合成大鼠EPO基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-EPO.经酶切、PCR及测序鉴定,再经PacⅠ酶切线性化后电转化感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdTrack-CMV-EPO,经PacⅠ酶切后转染至293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定及RT-PCR和Western blot鉴定.结果:重组腺病毒质粒AdEPO经鉴定均构建正确;重组腺病毒AdEPO在293细胞中成功包装,扩增后病毒滴度为1.17×1011 IU/mL;EPO在293细胞中成功表达.结论:成功构建了EPO重组腺病毒质粒,为深入研究EPO在大鼠内耳的神经保护作用奠定了基础.