大鼠Rars基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定

摘要

目的构建针对大鼠Rars基因的si RNA重组腺病毒载体,并观察大鼠神经元细胞病毒转染前后目的蛋白表达量变化。方法将原代培养的大鼠神经元细胞随机分为观察组、阴性对照组及空白对照组。观察组细胞转染携带Rars si RNA序列的重组腺病毒,阴性对照组细胞转染携带Scramble无意义序列的重组腺病毒,空白对照组不转染任何病毒。观察各对照组表达绿色荧光蛋白(GFP)的阳性细胞数,计算转染率,并检测转染前后Rars基因对应产物精氨酰-t RNA合成酶(Arg RS)蛋白的表达量,评价基因沉默效率。结果成功构建包含Rars基因干扰序列及Scramble序列的重组腺病毒,病毒滴度达1010级。利用重组腺病毒感染大鼠神经元细胞48 h后,绝大部分细胞表达GFP,转染率>95%。含Rars干扰序列的病毒转染细胞可使Arg RS蛋白表达量显著降低(P<0.01),沉默效率>60%。含Scramble对照序列的病毒则不能产生明显的基因沉默效应。结论本实验所构建的si RNA重组腺病毒载体可有效沉默大鼠Rars基因,降低Arg RS蛋白表达。