嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

摘要

目的:建立嗜肺巴斯德菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法.方法:针对嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因设计特异性引物和探针,建立嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008～2011年采集的1680份样本进行检测.结果:嗜肺巴斯德菌TraqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法具有高度特异性,对多杀巴氏杆菌、产气巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测灵敏度达22拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.488,PCR效率为100％.荧光定量PCR检测1680份样本,检出137份嗜肺巴斯德菌阳性.该方法可直接从样本中特异性地检出嗜肺巴斯德菌.结论:TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有灵敏、特异、稳定的特性,适用于嗜肺巴斯德菌的快速检测.