双向诱导的骨髓间充质干细胞体外成骨与成血管的研究

摘要

目的:探索双向诱导的骨髓间充质干细胞形成内皮细胞、成骨细胞与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)共存体系的体外成骨与成血管的能力.rn 方法:采用密度梯度离心法分离培养兔BMSCs.贴壁细胞分为四组:A组(单纯的BMSCs组)、B组(成骨诱导的BMSCs组)、C组(内皮诱导的BMSCs组)和D组(双向诱导的BMSCs组).通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,并采用流式细胞仪检测诱导前后的细胞表面抗原.四组细胞均用茜素红染色观察钙结节.基质胶成血管法观察四组细胞体外成血管的能力.rn 结果:1、经流式细胞学检测,分离培养的BMSCs主要表达CD90、CD105和CD44;BMSCs向内皮细胞诱导一周后,细胞表面抗原CD34和CD133的表达升高,而CD90和CD105的表达减少,相比诱导前差异具有统计学意义(P＜0.05);然后BMSCs向成骨细胞继续诱导一周后,细胞表面抗原CD44和HLA-DR升高,相比诱导前差异具有统计学意义(P＜0.05).2、茜素红染色结果显示D组的钙结节大于B组,而A组和C组未见钙结节形成.3、体外血管新生试验中,C组的管道数目与面积大于D组,两组差异有统计学意义(P＜0.05),而A组与B组未见管道形成.rn 结论:BMSCs双向诱导形成内皮细胞、成骨细胞与BMSCs共存体系,在体外共培养过程中不仅可以形成钙结节,而且可以形成微血管.因此双向诱导的BMSCs有利于骨组织和血管联合构建,是一种良好的构建组织工程骨的种子细胞.