四种酵母启动子在乳酸克鲁维酵母中的功能比较

摘要

目的：评价四种酵母启动子在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis GG799)中表达外源蛋白的强弱,寻找启动子转录功能较好的启动子从而实现外源蛋白在宿主细胞中的高效表达. 方法：在pKLAC1表达载体基础上,通过破坏乳酸克鲁维酵母自身β-半乳糖苷酶(lac4)启动子后得到表达载体pKLAC1★,采用PCR扩增的方法克隆了来源于K.lactis的ADH4启动子和来源于S.cerevisiae的GAL7及GPD1启动子,分别与作为报告基因的绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列融合,将构建成功的重组表达载体经BstXI线性化后电转化法转入K.lactis GG799,筛选得到单拷贝整合重组菌株,通过荧光显微镜观察及荧光分光光度计对EGFP表达量测定比较不同启动子的功能. 结果：荧光显微镜观察结果显示,pKlADH4、pScGAL7、pScGPD1、pLAC4均成功启动了EGFP的表达.通过荧光分光光度计对重组乳酸克鲁维酵母胞内表达的EGFP荧光强度测定,pScGPD1具有表达水平高且在不添加诱导剂的情况下即能高效表达外源蛋白的优点,同时受高渗条件诱导.pKlADH4、pScGAL7和pScGPD1启动子在YPD中可组成型表达,不同的是,pKlADH4在添加乙醇后,表达能力减弱,而pScGAL7和pLAC4在添加半乳糖后,表达能力均得到提高. 结论：成功评价了四个不同酵母启动子在K.lactis中的功能,为进一步实现外源蛋白重组高效表达进行了有益探索.