猪霍乱沙门氏菌携带的双启动子表达载体pEGFPPtrcR的构建

摘要

猪霍乱沙门氏菌C500株不仅可以作为预防猪沙门氏菌病的活疫苗，还可作为运送其他DNA疫苗的优良载体，并通过粘膜免疫诱导产生针对特定抗原的各种免疫应答。为了增强其携带DNA疫苗的免疫效力，本研究在真核表达载体pEGFP-C1的基础上，将其真核启动子CMVIE与原核启动子Ptrc串联，并在其多克隆位点MCS下游引入rrnbT1T2转录终止序列，构建了真、原核双启动子表达载体pEGFPPtrcR。用1×TSS法将其转化C500，得到工程菌C500／pEGFPPtrcR，SDS-PAGE检测了报告基因EGFP的原核表达，该菌在荧光显微镜下能发出强烈绿色荧光，并被证明在体外至少能稳定遗传20代；采用脂质体介导法将质粒pEGFPPtrcR转染真核Vero细胞，EGFP在其胞核和胞浆表达，24h后观察可到明显绿色荧光。结果表明，双启动子表达载体pEGFPPtrcR构建成功，预示其携带的外源基因既可在C500中表达，又可在体细胞中表达，这样能有效提高抗原的表达量从而诱导更强的免疫应答，为研制以C500为载体的新型DNA疫苗的发展开辟了一个新的途径。