黔产宽叶缬草RAPD体系优化及遗传多样性分析

摘要

目的：为了避免贵州宽叶缴草药用植物的枯竭，势必要对药材进行规范化栽培种植(GAP)。采用正交设计法安排RAPD体系优化试验，建立可用于黔产宽叶缘草RAPD分析的最佳反应体系，并进行遗传多样性分析. 方法：采用L16(45)正交设计,确立宽叶缬草最佳RAPD反应体系;通过对宽叶缬草基因组DNA样本进行RAPD扩增,分析样本Nei's多样性指数(H)、Shannon's多样性指数(Ⅰ)以及Jaccard遗传相似性系数(GS),并对其进行聚类分析. 结果：25μL最适宽叶缬草RAPD反应体系为2.0U Taq DNA聚合酶、0.4mmol/L dNTPs、4.0mmol/L Mg2+、4.0μmol/L随机引物、60ng模板DNA;从40条随机引物中筛选了13条对20份样本进行RAPD扩增,共扩增出102条清晰条带,其中88条具多态性,多态率(PPB)为86.27％;20份宽叶缬草样本的Nei's多样性指数(H)和Shannon's多样性指数(Ⅰ)分别为0.3030和0.4537,Jaccard遗传相似系数(GS)介于0.4118～0.8824之间;通过UPGMA聚类可将宽叶缬草的20份样本聚为两类,来自剑河地区的13份样本聚为一类,江口地区的7份样本聚为一类,且剑河地区的栽培样本与野生样本又分为2个明显的分支. 结论：黔产宽叶缬草种水平上具有较高的遗传多样性,所得RAPD标记可用于宽叶缬草遗传多样性研究,并为今后开发宽叶缬草的选种与育种奠定基础.