氨基糖苷类抗生素和PTC124对HERG基因无义突变拯救效率的研究

摘要

目的：探讨不同种类的氨基糖苷类抗生素和PTC124对导致长QT综合征2型的无义突变HERG基因拯救效率的差异.方法:聚合酶链反应法制备相关突变体:R1014X,W927X, R863X和E698X，并将其克隆到真核细胞表达载体中;将HERG基因野生型及不同无义突变体的cDNA分别瞬时转染入体外培养的HEK293细胞中;药物拯救采用将转染24h后的HEK293细胞分别在含6418、庆大霉素、妥布霉素或PTC124的培养液中孵育24h0 Western-blot法检测给药前后HERG通道蛋白表达及含量的变化。膜片钳观察给药前后突变体电流的变化。结果:氨基糖普类抗生素是由氨基糖和氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素，主要分为两大类:4,5-二脱氧链霉胺衍生物和4,6-二脱氧链霉胺衍生物，后者主要包括G418、庆大霉素。实验结果表明6418能够显著恢复R1014X的功能性表达，其拯救效率存在剂量依赖性。尽管庆大霉素的拯救效率不及6418，但是其作用效果与6418相比存在相同的趋势。妥布霉素未观察到明显的拯救作用。PTC 124仅能微弱的增加HERG蛋白的表达和尾电流，但对通道动力学无明显影响。在对W927X,R863X和E698X的拯救过程中观察到，随着突变体长度变短，6418、庆大霉素和PTC124的拯救作用也逐渐消失。结论：不同的化学物质对无义突变HERG基因的拯救效率存在明显差异，且对不同的突变体其作用效应不同。