原发性膀胱输尿管反流Pax2基因启动子DNA甲基化状态研究

摘要

目的：(1)检测Pax2基因在人输尿管组织的表达情况.(2)检测Pax2基因启动子DNA甲基化水平.(3)通过检测DNA甲基转移酶(Dnmt)的表达分析引起DNA甲基化差异的可能原因.方法：(1)材料:病例组标本21例,来自我院泌尿外科行输尿管再植术的Ⅲ级以上原发性VUR患儿术中切下的异常输尿管下段组织,对照组3例,分别为外伤行肾、输尿管切除术,左输尿管结石伴末端狭窄行输尿管再植术,及肾移植术中取得的输尿管下段组织.(2)方法:通过免疫组织化学、Western blot及Real-time PCR检测VUR及对照组输尿管组织蛋白质及mRNA的表达,然后通过重亚硫酸盐测序(BSP)方法检测VUR及对照组输尿管组织Pax2基因启动子DNA甲基化水平,最后通过Real-time PCR检测VUR及对照组输尿管组织三种DNA甲基转移酶的mRNA表达.结果：(1)Pax2表达于VUR输尿管上皮细胞胞核,且VUR组Pax2蛋白质(P=O.011)及mRNA(P＜0.0001)表达水平显著高于对照组.(2)Pax2的蛋白质表达量在不同年龄(P=0.309)、性别(P=0.316)及反流等级(P=0.339)的VUR中无显著差异.(3)VUR组Pax2基因所测启动子序列的DNA甲基化水平显著低于对照组(P=0.045),但与mRNA的表达无显著相关性(P=0.091).(4)Pax2基因所测启动子序列的DNA甲基化水平在不同年龄(P=0.574)、性别(P=0.347)、反流等级(P=0.881)的VUR中无显著差异.(5)VUR组Dnmt3a显著低于对照组(P=0.027),但Dnmt1、Dnmt3b的差异无统计学意义.结论：(1)VUR组Pax2基因蛋白质及mRNA的表达显著高于对照组,其表达的意义有待进一步研究.(2)VUR组Pax2基因所测启动子序列的DNA甲基化水平显著低于对照组,在一定程度上可以解释Pax2在输尿管上皮细胞的高表达.(3)Pax2基因所测启动子的DNA低甲基化可能是由低水平的Dnmt3a所引起.