新型一步法HBV荧光定量PCR检测试剂性能评价

摘要

目的：rn 对圣湘生物一步法HBV-DNA荧光定量PCR试剂进行检测性能评价.rn 方法：rn 1、线性范围：用混合阴性血清按10倍梯度稀释科华试剂检测的107的高浓度样本至0次方,采用圣湘试剂检测每个梯度浓度,并计算梯度稀释的直线方程;rn 2、最低捡出限：采用圣湘试剂检测低浓度样本(103左右)原倍、2倍、4倍、8倍稀释后的定量结果,均做3个复孔,计算各稀释度均数、标准差及CV值.rn 3、精密度：批内精密度：一次扩增实验中,采用圣湘试剂分别检测的一高浓度(106左右)和一低浓度(104左右)的血清样本,均重复10次,计算均数、标准差及CV值.日间精密度：连续五天采用圣湘试剂检测一高浓度(106)和一低浓度(104)的血清样本,计算五天均数、标准差及CV值.rn 4、比对实验：采用用科华试剂和圣湘试剂同时检测40份日常血清标本,比对两种试剂的检测值的相关性,并计算线性回归方程.rn 结果：rn 1、线性范围：圣湘试剂的梯度稀释实验的扩增曲线间隔均匀,平滑优美,根据定量结果绘制回归直线方程为v=-0.951x+9.1937,R2=0.9989.rn 2、灵敏度：圣湘试剂检测原倍(103)、2倍、4倍、8倍稀释血清的定量结果显示：原倍、2倍、4倍稀释的CV值(2.83％、3.50％、13.13％)均小于15％,说明试剂检测最低检测限可达到2.5E+02IU/ml左右.rn 3、精密度：批内精密度：圣湘试剂批内重复性实验的扩增曲线呈光滑的"S"型,扩增效率高且重复性好.定量结果显示：高浓度(106)和低浓度样本(104)批内CV值(0.59％、1.56％)均小于1/4允许误差范围(10％),批内精密度符合要求.日间精密度：圣湘试剂连续五天重复检测结果显示：高浓度(106)和低浓度样本(104)的日间CV值(0.23％、0.60％)均小于1/3允许误差范围,日间精密度符合要求.rn 4、比对实验：根据圣湘与科华试剂的检测结果绘制回归直线方程为y=1.0259x+0.4857,R2=0.9534,结果说明两种试剂具有较好的延续性.rn 结论：rn 本研究通过一系列实验指标验证了圣湘一步法检测试剂具有较好的检测性能，结果显示圣湘一步法HBV DNA试剂扩增效率好，扩增曲线优美平滑，其检测的线性范围为10^2-10^8，最低检出限达到2.5E+02。其批内及日间CV值均小于1/4允许误差范围(10%)，精密度符合要求。与科华试剂做比对实验，结果显示两种试剂具有较好的相关性(r2>0.95)，说明新型一步法HBV DNA试剂可替代传统煮沸裂解法HBVDNA定量试剂。