伊氏锥虫微管结合蛋白p15基因的分子克隆与表达

摘要

微管相关蛋白已成为热门的候选抗原分子或药物作用靶子.根据已报道的布氏锥虫(Trypanosoma brucei)微管结合蛋白p15(Tb-MAP p15)基因及其3'非翻译区保守序列设计引物，采用PCR法从伊氏锥虫云南水牛株(Trypanosoma evansi YNB)基因组DNA中首次克隆得到伊氏锥虫微管结合蛋白p15(Te-MAP p15)基因.克隆片段长273bp，编码90个氨基酸，预测分子量9.0kD.经同源性比较，与Tb-MAP p15基因同源率达到94％.抗原性分析Te-MAP p15基因表达的氨基酸序列比T.brucei多5个，均参与组成其中一个抗原决定簇，并且此抗原决定簇序列形成在蛋白中常作为识别位点的α螺旋.将该基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体，转化大肠杆菌(Escherichia coli)RS21宿主菌，经IPTG诱导，可成功表达.重组融合蛋白大小为35kD，与预期大小一致，经SDS-PAGE和Western-blot鉴定为重组伊氏锥虫云南水牛株p15蛋白.