绿色巴夫藻cDNA文库的构建及EST序列分析

摘要

以绿色巴夫藻为实验材料,以λTriplEx2为载体,利用SMART技术构建绿色巴夫藻cDNA文库;经测定文库的滴度为7.5x105pfu/ml,重组率为92﹪;利用PCR方法扩增插入片段的大小,其长度在500bp-1.5kb之间,表明该文库可用来筛选低丰度mRNA的cDNA克隆.对cDNA文库中的阳性克隆进行随机挑选,PCR检测插入片段的长度,从插入片段的5'端单向测序,将测序结果与NCBI数据库进行Blast比对,初步获得了200个有研究价值的EST序列和cDNA克隆,为进一步研究绿色巴夫藻功能基因的表达奠定了基础.