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绿色巴夫藻cDNA文库的构建及EST序列分析

     

摘要

将绿色巴夫藻(Pavlova viridis)培养液逐种加入氨苄青霉素、硫酸庆大霉素、硫酸阿米卡星3种抗生素处理,经检验后无杂菌污染.以该藻种为实验材料,以λTriplEx2为载体,利用SMART技术构建其cDNA文库.经测定文库滴度为6×106pfu/mL,重组率为98%.利用PCR方法检测cDNA文库插入DNA片段的大小,其长度为0.5~2kb,表明该文库达到建库要求,可用来筛选低丰度mRNA的基因克隆.对cDNA文库中的阳性克隆进行随机PCR扩增,挑选插入DNA片段较大的克隆,进行5'末端单向序列测定,测序结果与NCBI数据库进行BLAST比对,获得了200个有研究价值的EST序列和cDNA克隆,为进一步研究和开发绿色巴夫藻的功能基因奠定了基础.

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