卡尼鄂拉蜂zinc transporter 7-like基因表达水平变化研究

摘要

本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似基因(Zinc Transporter 7-like,ZnT-7-1ike),制备ZnT-7-1ike多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况.运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-1ike基因,经过生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273bp)作为多肽免疫序列.将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western Blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western Blot技术检测该基因在不同日龄王浆腺中的相对表达量.结果,克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-1ike基因,大小为1065 bp;SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1:64000,且具有很高的特异性:该基因在卡尼鄂拉蜂5个日龄中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄最高,12日龄最低;ZnT-7-1ike蛋白表达与转录水平基本一致.成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-1ike基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-1ike多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-1ike在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量,为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-1ike基因的功能奠定了基础.