Gottfried和SB-1A株猪轮状病毒截短VP8*蛋白的免疫原性分析

摘要

目的：原核表达猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化重组蛋白并检测其免疫原性。方法：经PCR从含有全长VP4基因片段的重组质粒pCR4-Gottfried VP4和pCR4-SB-1A VP4中分别扩增截短的VP8*基因(△VP8*,64～223位氨基酸),分别插入原核表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28a-Gottfried-△VP8*和pET28a-SB-1A-△VP8*,分别转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。应用ProBondTM Resin纯化两种重组蛋白,重组蛋白与Al(OH)3佐剂混合后,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果：两种重组表达质粒经双酶切和测序证实构建正确;表达的两种目的蛋白相对分子质量约25000,均以包涵体和可溶性两种形式存在,均可与鼠源抗His tag单克隆抗体特异性结合;纯化的两种重组蛋白纯度均在95％以上,免疫BALB/c小鼠可产生较高的血清抗体水平。结论：成功在大肠埃希菌中表达了PRV Gottfried株和SB-1A株截短的VP8*基因,纯化的两种蛋白免疫原性较好,为进一步研制安全、高效的PRV亚单位疫苗奠定了基础。