饲养层密度对兔类ES细胞分离培养的影响

摘要

探讨饲养层细胞接种密度对兔类ES细胞分离培养影响,筛选适合兔类ES细胞分离培养最适饲养层密度.将兔囊胚分别接种到密度分别为10×103·cm-2、20×103·cm-2和40×103·cm-2的小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast cell,MEF)饲养层上,观察兔类ES细胞贴壁和克隆生长情况,并对所得兔类ES细胞进行碱性磷酸酶和Oct-4检测.结果表明,接种于密度为20×103·cm-2饲养层上的囊胚贴壁率(82.5％)、内细胞团(Inner cell mass,ICM)形成率(67.5％)高于接种子密度为40×103·cm-2的饲养层上囊胚贴壁率(80.0％)、内细胞团(Inner cell mass,ICM)形成率(65.7％),差异不显著(P＞0.05);显著高于(P＜0.05)接种子密度为10×103.cm-2饲养层上的囊胚贴壁率(55.6％)、ICM形成率(44.4％).密度为20×103·cm-2饲养层上的兔类ES细胞F1、F2代细胞克隆率均显著高于其他两组(P＜0.05),最高已传至20代;获得的兔类ES细胞经碱性磷酸酶染色及Oct-4抗原表达检测均呈阳性.密度为20×103个·cm-2的MEF饲养层可更好支持兔类ES细胞体外培养.