秦川肉牛ADIG基因过表达重组腺病毒载体的构建

摘要

本文旨在构建秦川肉牛ADIG基因的重组腺病毒载体,为下一步研究该基因在秦川肉牛脂肪细胞中表达,进而研究该基因在脂肪细胞分化过程中的分子机制和相关信号通路.根据NCBI收录的牛的mRNA(NM_001113720.1)设计引物,通过RT-PCR和PCR扩增获得目的基因,将其连接pMD19-T simple Vector并测序正确.质粒提取纯化后,通过BglⅡ与salⅠ双酶切,然后胶回收酶切产物,将其连接到穿梭载体pAdTrack/CMV上并线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy1的E.coli Bj5183感受态细胞进行同源重组,并用pacⅠ酶切鉴定,提取质粒后转化E.coli Top10进行扩繁.将测序结果与NCBI上收录的序列相比对,CDS区完全匹配,说明成功构建ADIG基因的重组腺病毒表达载体pAd-ADIG,可用于下一步的病毒包装。