应用高内涵筛选探究芫花和了哥王非遗传毒性致癌性机制

摘要

目的:课题组前期研究提示中药芫花和了哥王可诱导Bhas42细胞转化,有潜在非遗传毒性致癌性.本研究通过使用高内涵分析仪检测Bhas42细胞内的活性氧水平(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和内质网功能(ER function),在亚细胞水平上探究芫花与了哥王诱导Bhas42转化的机制. 方法:选择芫花和了哥王可诱导Bhas42细胞转化的三个浓度(0.5、1、5μg/mL),并平行设DMSO阴性对照组.Bhas42细胞与受试物处理24h、48h、72h后,与荧光染料(核/ROS:hoechst33342/DCFH-DA;核/MMP:hoechst33342/Mito Tracker;核/ER function:hoechst33342/ER-Tracker)在37°C含5％CO2,95％湿度的培养箱孵育30min,染色后的样本经5％的乙醇固定并采用高内涵In Cell2000Analyzer细胞成像系统检测细胞内荧光强度. 结果:(1)活性氧水平：与DMSO组相比，芫花和了哥王可诱导Bhas 42细胞内的ROS呈显著性增加(P<0.05)，且具有浓度和时间依赖性，其效应在72h时达到峰值。(2)线粒体功能：芫花和了哥王可降低Bhas 42细胞的MMP，该效应具有一定的浓度相关性，随受试物作用时间的延长，芫花与了哥王对MMP的抑制作用更加显著(P<0.05); 24h和48h时，仅芫花5μg．mL-1浓度组可显著性降低细胞MMP(P<0.05). 结论:在可诱导Bhas 42细胞发生恶性转化的浓度条件下，芫花与了哥王均可显著升高Bhas 42细胞内的ROS水平，并降低线粒体膜电位和内质网功能。研究提示经芫花和了哥王处理后，细胞处于氧化应激状态且出现线粒体功能损伤和内质网应激。其中芫花诱导Bhas 42细胞线粒体膜电位损伤时间更长久。氧化应激所致的线粒体功能损伤和内质网应激是芫花、了哥王诱导Bhas 42细胞转化机制之一。