基于细胞影像的中药注射剂高内涵肝毒性检测方法建立及其对四种常用中药注射剂的应用

摘要

本研究采用人源HepG2细胞,采用PerkinElmer Operetta高内涵筛选系统,以细胞数目、细胞核面积、线粒体质量、线粒体膜电位、血浆膜通透性作为检测指标,分别采用Hoechst 33342、Mitotracker Deep Red FM、Rodamine 123、PI iodide四种荧光染料标记不同细胞结构,选择三种机理明确的具肝毒性药物乙酰氨基酚、FCCP、盐酸阿霉素为阳性药,建立一种基于细胞影像学的多指标高内涵分析方法来研究中药注射剂的肝毒性.采用此方法对四种具不同程度肝毒性不良反应报道的中药注射剂进行评价(丹红注射液(DHI)、香丹注射液(XDI)、脉络宁注射液(MLNI)、复方苦参注射液(FFKSI)),并采用28天亚急性动物毒性实验对结果进行验证.四种中药注射剂中,XDI和FFKSI稀释100倍剂量组细胞数目明显减少,XDI稀释100倍时线粒体质量显著增加,FFKSI各剂量组线粒体膜电位均降低.结果表明FFKSI各剂量组和高剂量的XDI损害HepG2细胞的线粒体引起肝细胞损伤.高内涵评价结果与动物亚急性试验结果保持一致,所建立的方法适用于中药注射剂等复杂体系肝毒性研究,为中药临床前药物筛选和上市后安全性在评价提供技术支持.