雷公藤多苷对TNBS溃疡性结肠炎大鼠miR-146a，miR-146b及TLR4/MyD88依赖信号通路的调控研究

摘要

目的：研究雷公藤多苷(TWP)对TNBS溃疡性结肠炎大鼠miR-146a,miR-146b及TLR4/MyD88依赖信号通路的调控作用. 方法：采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠的方法建立TNBS溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型.模型建立成功后,将90只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、TWP低、中、高剂量组(3、6、12mg/kg)、硫唑嘌呤(AZA)组(6g/kg),每组15只.各组分别给予相应药物连续灌胃14天.每隔3天评估UC大鼠疾病活动指数(DAI).14天后解剖所有大鼠,留取相应结肠组织观察各组大鼠结肠组织大体及镜下病理表现,并对其进行评分.采用qPCR法检测miR-146a,miR-146b的表达;采用western blotting法和RT-PCR法检测UC大鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖信号通路相关分子(TLR4/MyD88/TRAF-6/N F-κB/TNF-α/IL-1β)在mRNA及蛋白水平的表达情况. 结果：DAI评分,大体及镜下表现和评分均提示TNBS UC大鼠模型造模成功,TWP对UC大鼠临床症状的改善及黏膜愈合具有一定作用,该作用与AZA相比相当或强于AZA.qRT-PCR结果提示：与正常对照组相比,模型对照组中miR-146a,miR-146b表达明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).与模型对照组相比,药物TWP及AZA均可显著抑制miR146a,miR-146b,差异具有统计学意义(P＜0.01).其中TWP中剂量组对两者的抑制作用最强.RT-PCR及WB实验均提示：与正常对照组相比,模型对照组中TLR4/MyD88依赖信号通路相关的分子无论在mRNA还是蛋白水平表达均显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.01).与模型对照组相比,TWP呈剂量依赖性地抑制该信号通路上各节点分子mRNA及蛋白水平的表达,其中TWP高剂量组中各节点分子mRNA及蛋白表达水平显著低于模型对照组,且差异具有统计学意义(P＜0.05).在与阳性对照组AZA组比较,TWP高剂量组对该信号通路上游因子(TLR4/MyD88/TRAF-6/NF-κB)mRNA及蛋白表达水平的抑制作用略好于AZA组,而对该信号通路的末端炎症因子TNF-α及IL1βmRNA及蛋白水平的抑制作用却略逊于AZA组,但上述两种差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论：在TNBS UC大鼠模型中,TWP可以通过抑制miR-146a,miR-146b的表达,进而抑制TLR4/MyD88依赖信号通路释放炎症因子IL-1β及TNF-α,其作用强度与剂量呈正相关.TWP对TLR4/MyD88依赖信号通路亲和性优于AZA,但对末端炎症因子IL-1β及TNF-α的抑制作用略逊于AZA.