猪TREM2基因的克隆表达及针对猪TREM2胞外区多克隆抗体的制备

摘要

髓系细胞触发受体作为先天性免疫受体中的一类,在宿主先天性防御中起着相当重要的作用,到目前为止,对猪髓系细胞触发受体的研究还没有报导,为了深入了解猪髓系细胞触发受体2的生物学功能,首先根据Gen-Bank预测的猪TREM2(NM_001256777.1)的全基因序列,从猪肺泡巨噬细胞中提取的RNA为模板扩增TREM2的全基因片段,通过测序验证扩增序列的正确性.选取猪TREM2胞外区基因片段(438bp)连接到原核表达载体pET-28a中，利用原核表达系统获得了高效表达于包涵体中的重组TREM2蛋白(约21kDa)。利用亲和层析技术纯化获得TBEM2重组蛋白，以纯化的TREM2重组蛋白为免疫原，免疫BALB/c小鼠，每只小鼠免疫约100μg.制备多抗血清，通过Westem blot证明该多抗血清可以识别猪源TREM2分子。