普洱茶发酵样品胞外酶提取方法的建立

摘要

从发酵样品提取胞外酶是应用宏蛋白组学技术研究普洱茶发酵过程酶组成的第一步.本文通过对不同提取时间(超声2、4、6、8、10 min)与4 种提取方法(TCA/丙酮沉淀法、Tris/酚抽提-甲醇/醋酸铵沉淀法、Tris-HCl法和尿素/ 硫脲法) 提取样品蛋白含量以及十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳( Sodium dodecylsulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)结果比较,建立了以5×Tris-HCl(pH 7.4)为缓冲液,冰浴超声提取2min,酚抽提2 次,﹣20℃甲醇/醋酸铵沉淀过夜,预冷丙酮洗涤的从普洱茶发酵样品提取胞外酶的方法.应用建立的方法提取蛋白,双向电泳,获得了符合宏蛋白组学要求的图谱,为进一步开展普洱茶发酵样品的宏蛋白组学研究提供了前期基础.