基因Ⅳ型猪源HEV ORF3蛋白抗原表位的初步筛选

摘要

为进一步研究猪戊型肝炎病毒(HEV)开放阅读框3(ORF3)蛋白抗原表位的分布特征,本研究利用噬茵体随机肽库淘选技术,对本实验室制备并保存的一株抗HEV ORF3单克隆抗体进行4轮淘选,最终获得8种在目标区域编码不同12肽的噬茵体.经氨基酸序列比对发现,8种多肽中均含有与ORF3蛋白C末端一致的序列,主要集中在VVDLP、VDLP以及DLP,其中VVDLP所占比例最高.结果同时发现,在VVDLP上下游还存在不连续氨基酸,与其相距位置与ORF3 C末端一致,所有筛选得到的疑似氨基酸序列集中位于ORF3 C末端97位至112位区域内.利用ELISA方法对5段合成的多肽SAPPLPPVVDLPQLGL、VVDLP、SAPPLPPVVDLP、VVDLPQLGL和SAPPLPPQLGL进行免疫活性检测,仅有SAPPLPPVVDLPQLGL和SAPPLPPVVDLP能够和单克隆抗体结合.综上所述,本研究得到HEV ORF3疑似表位VVDLP,其上序列SAPPLPP对其抗原具有影响.