中华蜜蜂细胞色素P450家族Acc336A1基因的克隆及表达分析

摘要

本研究运用RT-PCR及RACE技术首次从中华蜜蜂中分离得到P450家族的一个基因，与意大利蜜蜂中P450家族的336A1基因有较高同源性，命名为Acc336A1。该基因的开放阅读框(ORF)包含1491个核苷酸，编码一个有497个氨基酸，分子量大约为56.95kDa，等电点为8.8的蛋白。分别用不同农药(蚊蝇醚、百草枯)、重金属(氯化汞)及紫外线处理蜜蜂，然后采用定量PCR和Western-blot技术动态检测Acc336A1在mRNA和蛋白水平上的表达模式，通过免疫组化的方法对蜜蜂Acc336A1蛋白进行组织定位分析，为进一步研究细胞色素解毒功能奠定基础。rn 定量PCR结果显示，Acc336A1基因对紫外线，蚊蝇醚、百草枯和氯化汞均有较明显反应，在处理一段时间后基因的表达量呈现先上升后又略微下降的趋势，并且一直高于对照组，整体是呈现上调表达。表面中华蜜蜂Acc336A1参与对于紫外线、农药、重金属等不良环境的抵御作用。免疫组织化学结果显示，Acc336A1广泛的分布在气孔、体壁表层及眼部周围组织;然而在眼内部却几乎没有Acc336A1的存在。此外，Acc336A1大量印染着腹部表层细胞，胸部背板组织也是Acc336A1分布的主要区域。这些结果表明，Acc336A1主要在中华蜜蜂的表皮部位发挥其解毒作用。