多基因联合重组腺病毒对喉癌细胞生长的抑制作用

摘要

目的：探讨复制缺陷型腺病毒携带多基因(p53,B7—1和GM—CSF)对体外喉鳞癌细胞生长的抑制作用。rn 方法：①在体外,利用多基因联合(p53,GM—CSF,B7-1)重组的复制缺陷腺病毒载体BB-102感染三个喉鳞癌细胞系(Hep-2、LSC-1及L-17),48小时后用免疫组化,流式细胞术,EIISA等检测目的基因是否表达蛋白。以每次给予等量维持细胞生长的DMEM作空白对照；以相同MOI的Ad—GFP作阴性对照；比较：p53蛋白表达时,以相同MOI的Ad—p53做阳性对照。②用扫描电镜和TUNEL法检测细胞的原位凋亡,外周血淋巴细胞毒性试验观察其对喉癌细胞免疫杀伤,MTT法观察其对喉癌细胞生长的抑制。对照组设计同上。rn 结果：①体外试验中,BB-102感染喉癌细胞48小时后(MOI=50pfu／cell),三种目的基因表达明显,不同细胞系之间没有显著差异(p<0.01)。与Ad—GFP相比,BB—102转染后p53蛋白表达明显(p<0.01)：与Ad—p53相比,BB-102表达丰度低(p<0.05)。B7—1表达从1.32％提高到55.03％(三个细胞系均数)。GM—CSF在转染后24小时即开始升高,持续两天后低水平维持一周。②体外试验中,与Ad—GFP相比,BB-102(MOI=50pfu／cell)感染后喉癌细胞出现明显凋亡(p<0.05),生长受到明显抑制。和Ad—p53相比,凋亡没有显著差异(p>0.05),但外周血淋巴细胞毒性试验显示喉癌细胞生长受到更强的抑制效应(p<0.05)。上述三个指标在喉癌三个细胞系之间无显著差异(p>0.05)。rn 结论：BB-102感染喉癌细胞后,体外试验显示目的基因都得到有效表达,肿瘤细胞出现凋亡,生长受到明显抑制,表明多基因联合重组腺病毒治疗喉癌的方案是可行的,为今后多基因联合治疗恶性肿瘤作了有益探索。