BC ELISA定量检测人表皮生长因子试剂盒的研制及初步应用

摘要

目的：建立亲和-生物素酶联免疫吸附方法(ABCELISA)定量检测人表皮生长因子(EGF)的试剂盒. 方法：首先以纯化的重组人表皮生长因子(rhEGF)为抗原,制备兔抗rhEGF多克隆抗体和鼠抗rhEGF单克隆抗体(McAb)并对其生物学特性进行鉴定,用生物素标记抗rhEGFMcAb,然后建立ABCELISA定量检测人EGF的方法,并应用该方法检测正常人和肿瘤病人血清中EGF含量. 结果本法的灵敏度为0.050ng/mL,批内变异系数＜4﹪,批间变异系数＜6.3﹪,回收率为95.7﹪～102.5﹪,特异性鉴定显示与相关蛋白无交叉方应,正常人和肿瘤病人血清EGF含量比较P＜0.05;与YES公司ABC-ELISA试剂盒比较,相关系数r=0.935(n=38). 结论成功制备抗人EGF的多克隆抗体和McAb,并初步建立检测人EGF的ABCELISA方法,该法具有灵敏、准确、特异、操作简单等特点,适于临床检测和科研应用.