小鼠骨髓来源树突状细胞培养鉴定和miRNA155表达测定

摘要

目的：建立一种体外诱导培养小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)的方法,并观察其不同成熟状态下的生物学形态,考察细胞表型及胞内miRNA155的表达水平.rn 方法：联合应用重组小鼠粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素－4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓单个核细胞向DCs分化,LPS诱导DCs成熟,并通过形态学及表型对细胞进行鉴定,采用实时荧光定量PCR(qPCR)法定量DCs内miRNA155的表达.rn 结果：通过细胞形态学观察、透射电镜观察及流式细胞术三方面鉴定,证实rmGM-CSF和rmIL-4联合培养的细胞为DCs.体外培养第6天,可见具有少量突起的未成熟DCs(iDCs),经脂多糖(LPS)诱导后可获得大量成熟DCs(mDCs),透射电镜可见典型的树突状细胞形态.与iDCs相比,mDCs表面共刺激分子CD86表达显著升高,高达90％以上,且胞内miRNA155的表达量显著高于iDCs,呈高水平表达.rn 结论：小鼠骨髓来源的单个核细胞体外诱导培养可生成大量iDCs和mDCs,mDCs特异性高表达miRNA155,为进一步通过靶向沉默mDCs中转基因表达来避免或降低细胞毒性反应的实验研究奠定了基础.