基于赖氨酸和半胱氨酸的蛋白结合和黄独素-E乙酸酯肝毒性的相关性

摘要

目的：研究EEA肝毒性与其呋喃环的代谢活化的相关性,并从其活性代谢产物对肝脏蛋白共价修饰的角度探究EEA的致毒机制.rn 方法：通过肝微粒体的体外孵化实验和小鼠体内实验鉴定了EEA的活性代谢物；通过重组酶孵化实验和酶抑制实验确定代谢活化EEA的P450酶亚型；通过化学合成四氢呋喃EEA并比较EEA和四氢呋喃EEA的肝毒性来探究该呋喃环的代谢活化在其导致肝毒性过程中的作用；对EEA的毒代动力学的研究；鉴定EEA与蛋白的赖氨酸和半胱氨酸残基的共价结合。rn 结果：EEA在体内和体外都能够被代谢活化产生顺丁烯二醛（cis-enedial）的活性中间体。在含有EEA和谷胱甘肽的肝微粒体孵化液中检测到源于EEA-顺丁烯二醛-谷胱甘肽(EEA-GSH)结合物，在给予EEA小鼠的胆汁和尿液中也检测到了该结合物。P450 3A4是代谢EEA的主要P450酶。EEA诱导小鼠产生肝损伤具有时间依赖性和剂量依赖性。酮康唑（P450 3A抑制剂）预处理对EEA诱导小鼠的肝损伤具有保护作用，使血浆中的EEA的Cmax和AUC分别升高了7倍和13倍，并且降低了尿液中的EEA-谷胱甘肽结合物的排泄。rn 结论：EEA本身不具有肝毒性，肝毒性来源于P450 3A4催化产生cis-enedial的活性中间体，该活性中间体与蛋白质的赖氨酸和半胱氨酸残基反应形成蛋白共价结合，从而导致肝脏毒性。