PcDNA.0-hVEGF165转染骨髓源性血管内皮祖细胞的体外研究

摘要

目的：探讨血管内皮生长因子(VEGF)转染骨髓源性血管内皮祖细胞(EPC)的体外基础研究，进而应用于细胞基因联合治疗的可行性。rn 方法：体外获取大鼠骨髓，分离单个核细胞后EGM-2MV培养基培养，免疫细胞化学及电镜鉴定EPC，脂质体介导PcDNA3.0-hVEGFl65转染EPC，转染后ELISA法检测培养上清中VEGF蛋白水平，转染后培养上清与ECV304细胞共培养以评价VEGF蛋白的活性，MTT法评价VEGF转染EPC后对细胞活性的影响，免疫细胞化学检测EPC表达VEGF、vWF、VEGF-R2(FLK-1)的变化。rn 结果：运用该方法能很好的富集EPC，获得的EPC能表达CD34、CDl33、FLK-l等特征性的细胞表面标志，脂质体介导PcDNA3.0-hVEGF转染EPC能表达较高浓度的VEGF蛋白水平，VEGF转染后对EPC的增殖无影响，转染后EPC细胞能保持内皮细胞系的特性，表达VEGF、vWF、VEGF-R2(FLK-1)的比率随时间而逐渐升高。rn 结论：脂质体介导PcDNA3.O-hVEGFl65转染EPC后能表达一定浓度的有功能的VEGF蛋白，并能促进EPC向着内皮细胞方向分化，可应用于体内治疗缺血性疾病。