滋阴清热方对SLE阴虚内热证患者PBMC基因及蛋白表达谱的影响

摘要

目的:SLE是对人们健康有着严重威胁,中医治疗又很具特色并具有明显疗效的疾病,我们选择临床治疗SLE有效的滋阴清热胶囊,开展滋阴清热胶囊对SLE基因和蛋白组学的研究,探索滋阴清热胶囊作用的基因表达和功能蛋白的微观物质基础,加深对中医药治疗SLE病机病理的理解,寻找有效的治疗SLE中西医结合方法。方法1.制备滋阴清热含药血清和建立外周血单一核细胞孵化实验体系:(1)以滋阴清热胶囊成人剂量换算成按高剂量和等效剂量配制含药血清灌胃液对大白鼠进行灌胃7天,于最后一次灌药后1小时心脏取血,滤膜过滤备用;(2)观察含药血清对SLE患者PBMC的抗ds-DNA抗体影响,确定最佳滋阴清热含药血清作用浓度,并将含药血清对SLE患者PBMC的抗ds-DNA抗体的影响作为滋阴清热含药血清是否有效的参照。2.观察滋阴清热含药血清对阴虚内热型SLE患者PBMC的基因表达谱影响:抽取阴虚内热型SLE患者静脉血分离PBMC然后(1)提取滋阴清热含药血清孵化后的SLE患者PBMC中的mRNA,(2)将mRNA反转录成cDNA并扩增,将cDNA加入基因芯片中进行检测,得出数据进行分析。3.观察滋阴清热含药血清对SLE患者PBMC的蛋白表达谱影响:抽取阴虚内热型SLE患者静脉血分离PBMC然后(1)提取滋阴清热含药血清孵化后的SLE患者PBMC中的蛋白,(2)将蛋白加入蛋白芯片中进行SELDI-TOF-MS检测,得出数据进行分析。4.设立地塞米松、不含药血清和空白对照组同时进行和滋阴清热含药血清一样的实验步骤。结果1.滋阴清热含药血清和地塞米松能够有效降低SLE患者PBMC的抗ds-DNA抗体浓度;2.含药血清、地塞米松和不含药血清PBMC基因表达谱的影响中(1)滋阴清热胶囊含药血清对SLE的PBMC基因表达谱具有明确调控作用,滋阴清热胶囊含药血清上调了51基因,下调了92个基因,地塞米松对SLE的PBMC基因表达谱调控中上调85个基因,下调126个基因。不含药血清上调147个基因,下调100个基因.(2)含药血清、地塞米松和不含药血清对SLE患者PBMC基因表达谱影响的两两比较:含药血清和地塞米松共同上调的基因有2个,共同下调的基因有12个,共同无上调和下调的基因有112个,仅含药血清下调、地塞米松无上调下调12个基因,含药血清上调、地塞米松同时无上调下调9个基因,含药血清同时无上调下调、地塞米松下调12个基因,含药血清同时无上调下调、地塞米松上调14个基因,没有发现含药血清和地塞米松调控方向完全相反的基因。含药血清和不含药血清同时上调8个基因,含药血清和不含药血清同时下调16个基因,含药血清同时无上调下调、不含药血清上调33个基因,含药血清同时无上调下调、不含药血清下调7个基因,含药血清上调、不含药血清同时下调无下调8个基因,含药血清下调、不含药血清同时下调无下调3个基因。地塞米松和不含药血清同时上调共6个基因,地塞米松和不含药血清同时下调15个基因,地塞米松上调、不含药血清同时无上调下调共27个基因,地塞米松下调、不含药血清同时无上调下调共8个基因,地塞米松同时无上调下调、不含药血清上调3个基因,地塞米松同时无上调下调、不含药血清下调共7个基因。(3)基因表达谱中筛选出一些基因:含药血清、地塞米松和不含药血清均下调基因有6个,它们是IRF1、FGFR4、POLA2、LOC51042、TGM1和CEPT1;地塞米松和不含药血清下调,含药血清无上调和下调的基因是PLAGL2;地塞米松和不含药血清上调,含药血清无上调和下调的基因是SMARCA2;含药血清地塞米松上调,不含药血清无上调和下调的基因是SC65和BPNT1;不含药血清上调,含药血清和地塞米松无上调和下调的基因是ZNF75;地塞米松下调,不含药血清和含药血清无上调和下调的基因是LOC51765;地塞米松上调,不含药血清和含药血清无上调和下调的基因是SAS,CD163、NPTXR、HOXB3、RPLPO、IL1R1及没有命名的一个基因;含药血清上调,不含药血清和地塞米松无上调和下调的基因是FGFR1;含药血清下调,不含药血清和地塞米松无上调和下调的基因是DDX6。3.含药血清、地塞米松和不含药血清PBMC蛋白表达谱的影响中(1)滋阴清热含药血清对阴虚内热型SLE的蛋白质组学的影响:和空白对照比较共有分子量为7027、4216、4236 Da的蛋白有表达差异,经过软件分析,分子量为7027、8590、7675Da的蛋白司作为模式判别滋阴清热含药血清和空白对照的差别。(2)地塞米松对阴虚内热型SLE的蛋白质组学的影响:和空白对照比较共有分子量为312Da的蛋白有表达差异,经过专业软件分析,分子量为3864、2929、3651、3676Da的蛋白可作为模式判别地塞米松和空白对照作用的差别。(3)不含药血清对阴虚内热型SLE的蛋白质组学的影响:和空白对照比较共有分子量为7027、2798、4236、5270、4469、2908、4436、3104、1280、2311、4085Da的蛋白有表达差异,经过专业软件分析,分子量为7027和5270Da的蛋白可作为模式判别不含药血清和空白对照作用的差别。(4)滋阴清热含药血清和不含药血清对阴虚内热型SLE的蛋白质组学比较:滋阴清热含药血清和不含药血清比较分子量为2800Da的蛋白有表达差异,经过专业软件分析,分子量为2800,3551和5877Da的蛋白可作为模式判别滋阴清热含药血清和不含药血清作用的差别。结论:1.滋阴清热胶囊具有独自的对阴虚内热型SLE药理作用,基因表达谱结果更是说明这种作用和地塞米松作用有很多相似之处;2.滋阴清热胶囊以能调控多个基因、多种功能蛋白为特色的发挥作用,形式具有中医整体观性质,同时这种作用对SLE的影响又是复杂的;3.通过对含药血清、地塞米松和不含药血清阴虚内热型SLE的一些基因和蛋白影响的研究,可能为我们提供研究SLE发病和防治新的途径。