抗CCP抗体斑点免疫印迹试验测定方法的建立与初步应用

摘要

目的：建立检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的斑点。免疫印迹试验,探讨其在类风湿关节炎(RA)疾病诊断中的价值。 方法：通过方阵滴定法选择斑点。免疫印迹试验检测抗CCP抗体的最佳实验条件,并用该法检测RA、其他疾病及健康人血清,同时与自行建立的ELISA法及欧蒙试剂抗CCP抗体检测结果作对比分析。 结果：综合斑点。色泽,清晰度,背景底色几个方面的因素考虑,建立的斑点。免疫印迹试验结果以RSA-CCP浓度为1.0 mg/l为佳,待检血清及酶结合物分别以1∶100和1∶6为最适工作浓度,抗原抗体反应及酶作用时间则以30min为宜.特异阻断抑制试验表明,斑点。显色程度随加入抗原浓度的增加由深到浅,表明斑点。免疫印迹法用于抗CCP抗体的检测具有较好的特异性。同时取两份阳性标本,同日内分别重复做六次,做批内重复性实验,并于当天,第三天和第十天每天做一次,作批间重复性实验,结果均保持一致。临床检测结果发现,抗CCP抗体对RA的诊断敏感性为52％,特异性为94％,并具在48例被诊断为RA患者中有25例抗CCP抗体阳性,显著高于其他疾病组和正常对照组(p＜0.01)。对比研究结果表明,该法与基于RSA-CCP固相模式建立的ELISA法具有高度的相关性(X2=131.712)和一致性(Kappa=0.771,p＜0.001),与欧蒙试剂检测结果亦具有高度的相关性(X2=24.147)和很好的一致性(Kappa=0.714,p＜0.001)。 结论：成功建立了抗CCP抗体检测的斑点。免疫印迹试验,实验结果稳定,特异,可靠,值得进一步推广和研究。