实时荧光定量PCR快速检测对虾IHHNV载量方法的建立和应用

摘要

目的：建立一种快速、定量、特异、灵敏的PCR方法用于对虾皮下造血组织坏死病毒(IHHNV)的早期诊断和疫情监测。rn 方法：根据GenBank登录的IHHNV毒株序列，使用生物学软件进行序列比对，在IHHNV保守区序列设计特异性引物与Taqman探针。对实时荧光定量PCR反应条件进行优化以缩短检测时间、提高特异性、灵敏度、重复性、并与普通PCR进行盲样测试的比对。rn 结果：本法线性范围5×102～5×107拷贝/ml，检出限5×101拷贝/ml，灵敏度超过普通PCR100倍，特异性高于普通PCR，重复性极好(S=0.035～0.39CV=0.13％～1.05％)，检测时间为普通PCR的1/5，现场盲样IHHNV检出阳性率高于普通PCR26.00％。rn 结论：本研究建立Taqman实时荧光定量PCR用于对虾IHHNV检测具有特异、灵敏、快速、定量、重复性好等优点。