传统乳制品来源的乳酸菌中Nisin启动子的克隆及功能验证

摘要

乳酸菌是应用最为广泛的食品级益生菌。大力推进关于乳酸菌的基础研究和开发应用，利用当今先进的生物技术(如蛋白质工程、基因工程、细胞工程等)开发新的优良工程菌株，必将从根本上改变我国传统的乳酸菌利用方式。增进乳酸菌益生作用的途径之一是使其表达一些同源或异源的目的蛋白，这就需要可靠的表达系统的协助。在这方面，国际上广泛使用的是采用Nisin启动子的NICE(Nisin-Controlled gene Expression)系统。本研究首先应用PCR方法，从传统乳制品中分离的乳酸菌中克隆Nisin启动子片段，之后将该片段插入到启动子探针型载体pNZ273中，然后通过组织化学的方法检测β-葡萄糖苷酸酶活性，对克隆的片段进行功能验证。结果表明：克隆的片段启动了报告基因gusA的表达，具有Nisin启动子的功能。