猪α-干扰素基因的修饰及其在毕赤酵母中的高效表达

摘要

为了提高猪α-干扰素基因在毕赤酵母中的表达效率，本研究对猪α-干扰素的7个基因进行了修饰。然后将经改造的猪α-干扰素基因克隆入毕赤酵母分泌型表达载pPICZαC中，电转化毕赤酵母x-33菌株，抗生索ZeocinTM高浓度筛选高抗性转化子。以PCR鉴定阳性重组菌株，筛选出的高拷贝重组菌株通过BMMY培养基，用甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blot印迹杂交结果证实，表达产物为重组猪α干扰素融合蛋白。薄层扫描与Bradford蛋白总量测定表明：基因修饰后，猪α干扰素融合蛋白的含量为0.3975mg/mL，与没有经过改造的菌株表达量0.08mg/mL比较，干扰素的蛋白含量有了明显的提高。抗病毒活性研究显示，基因修饰后的干扰素抗病毒活性为1.370×109，比修饰前的效价4.04×106提高300倍。