多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌

摘要

应用多重PCR反应(multiplex PCR，mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high—performance liquid chromatography，DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16s rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因为靶基因，选择2对引物，建立并优化了鉴别空肠弯曲菌的多重PCR体系，扩增产物分别为287 bp、159 bp。采用22株细菌验证了该多重PCR具有特异性。PcR检测的灵敏度在DNA水平上达到10 pg/μL；在人工模拟污染样品起始污染浓度为1．5个／mL时，42℃微需氧条件下培养24 h可被检出。在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中，检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性。本研究建立的多重PCR—DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌的快速检测。