沼泽型水牛与河流型水牛亚种间体细胞核移植的研究

摘要

屠宰场收集沼泽型水牛卵巢抽取COCs，体外成熟培养20-22h后借助纺锤体成像系统去核作为受体细胞，取出生6天的河流型摩拉水牛耳部成纤维细胞培养并传至第4代，于-196℃液氮中保存，解冻后直接作为供体细胞，采用卵周隙注射法组建重构胚。重构胚经电融合后用5μmol/1离子霉素处理5min，2mM的6一DMAP处理3-4h，而后转入水牛颗粒细胞单层培养至囊胚。试验结果表明重构胚的电融合卒为64.33％(889/1382，激活后体外培养分裂率为51.29％(456/889)，囊胚发育率为9.45％(84/1382)。将30枚新鲜核移植囊胚移植给13头自然发情或经同期发情的受体母牛，每头次移植鲜胚2-3枚，胚胎移植后30天经妊娠检查，确诊4头受孕，受胎率为30.77％(4/13).其中三头受体牛分别在妊娠的第65、75和90天流产，所流出的胎儿形态正常。一头移入三枚新鲜胚胎的杂交母水牛(摩拉水牛x沼泽型水牛)在妊娠的第335天自然顺利产下一雌性水牛犊，牛犊初生重39kg。至目前为止，克隆牛犊生长发育良好。