鸭病毒性肠炎dUTPas基因的鉴定及特征分析

摘要

dUTPase是一种催化水解脱氧尿苷三磷酸（dUTP)为脱氧尿苷单磷酸（dUMP）的普遍存在的重要水解酶。许多病毒编码病毒特异的dUTPase，通过降低细胞中的dUTP水平，减少dUTP在DNA合成中的插入和错配并为DNA的合成提供必需的原料(dTTP)，在保证病毒DNA复制的正确性和顺利进行上起了重要作用。本文首次报道了一个大小为1344bp，与疱疹病毒dUTPase 同源的鸭病毒性肠炎病毒dUTPase基因。该基因编码477个氨基酸，预测分子质量为49.7 kDa。多序列比对显示DEV dUTPase与其他已经鉴定的疱疹病毒dUTPase颇为相似，并且以单体的形式发挥作用。这五个保守排列形式为3-1-2-4-5的motifs已被确认，系统进化树分析表明DEV dUTPase 高度邻近于禽类疱疹病毒。此外，RNA斑点杂交，Western印迹及免疫荧光分析表明，这种酶在感染早期和晚期均有表达。免疫荧光证实，早在病毒感染4h后，DEV dUTPase可在宿主DEF细胞细胞质检测得到。感染后8h该酶由胞浆转移到胞核，然后于感染后12小时达到表达高峰，分布于细胞质和细胞核。该结果表明，DEV dUTPase基因可能在体外感染上是一个早期病毒基因，有助于确保高保真的基因组复制。