猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫荧光诊断方法的建立及其应用

摘要

以临床“高热综合征”病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-HBR变异株接种试验猪制备抗血清，采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG)，异硫氰酸荧光素(FITC)标记IgG，建立了一种直接免疫荧光诊断方法(DIFA)，用于病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中抗原检测。本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明，接种后16h检测到抗原阳性细胞，于60h～72h达到病毒增殖高峰；对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示，以腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高；对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38)。该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点，与RT-PCR法检测结果符合率为96.3%，对几种已知猪病毒抗原无交叉反应，标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定。DIFA为PRRSV的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感和特异的检测方法。