犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

用纯化的大肠杆菌BL21表达的重组F蛋白作为抗原，免疫BALB/c小鼠，采用传统的杂交瘤技术制备单克隆抗体。用ELISA、IFA、Western blot、细胞中和试验鉴定各株单抗的生物学特性。结果获得7株稳定分泌犬瘟热F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2D6，3E10，3A2，5B7，5F6，6H8，9B6)；单抗亚类鉴定结果分别为IgG2a，IgG1，IgG2b，IgG1，IgG1，IgG2a和IgG1；细胞中和试验初步证实2株单抗(5B7，9B6)具有中和犬瘟热病毒感染Vero细胞的作用,中和效价分别为1:320和1:640；液相相加试验证实7株单抗的作用位点不同，其中2D6，5F6的作用位点非常相近。本试验成功制备了7株抗犬瘟热F蛋白特异性单抗，其中两株具有中和活性，为进一步研究犬瘟热病毒F蛋白的结构和功能，以及临床诊断试剂盒研发和开发治疗性抗体打下了基础。