猪α干扰素的原核表达及抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒活性测定

摘要

为了研究高效广谱的基因工程抗病毒制剂，本研究设计引物自猪肝脏总DNA扩增、克隆猪α干扰素(PoIFN-α)成熟肽基因并亚克隆入pQE30载体进行原核表达，对表达的融合重组猪α干扰素(rPoIFN-α)蛋白通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤进行纯化，采用细胞病变抑制法分别测定rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗水泡性口炎病毒(VSV)增殖活性及在Marc-145细胞上抑制高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的增殖活性以分别评价rPoIFN-α的活性单位及其体外抑制高致病性PRRSV增殖所需的最低浓度。结果表明，克隆的PoIFN-α成熟肽，基因全长501bp，编码166个氨基酸；表达的rPoIFN-α蛋白分子量约20.7ku左右，与预期大小相一致；经纯化后的蛋白纯度在95%以上；纯化的rPoIFN-α蛋白在PK15细胞上抗VSV病毒活性单位为1.4482×104IU/mL(5.2×106IU/mg)，在Marc-145细胞上能完全抑制高致病性PRRSV增殖所需的rPoIFN-α蛋白最低有效量为640U/mL(2.3×104U/mg)。本研究表达了具有抗病毒活性的PoIFN-α蛋白，这些研究为新型基因工程抗病毒制剂的开发以及高致病性猪繁殖与呼吸综合征等病毒性疾病的预防和治疗奠定了基础。