牡蛎内脏中麻痹性贝类毒素结合蛋白的分离纯化

摘要

本文以香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis为对象,进行PSTs蓄毒培养,从其内脏中分离纯化得到PSTs结合蛋白(PSPBP),并对该结合蛋白的分子量进行检测.首先从牡蛎内脏中获得PSTs结合蛋白的粗提液,然后用硫酸铵沉淀法初步纯化,确定硫酸铵饱和度为40％～70％,再逐步分离纯化:先用凝胶层柱(S-100,Ψ16×300nm)进行分离,上样量2mL,浓度2.2 mg/mL,流速为0.5 mL/min,收集PSTs结合蛋白阳性峰;再用阴离子交换层析(Q-FF,Ψ16×20mm)对阳性峰纯化,上样量5mL,浓度2.2 mg/mL,上样流速0.5 mL/min,洗脱流速1mL/min,缓冲液Tris-HCl(含1 mol/LNaCl),采用梯度洗脱收集PSTs结合蛋白阳性峰;最后用RP-HPLC (Ψ250×20mm,D.S-5 μm,12 nm)制备,上样量100 μL,流速1mL/min,流动相是20％乙腈水溶液.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)检测分离纯化得到的PSTs结合蛋白的分子量.结果显示分离纯化得到的PSTs结合蛋白的分子量为33.5kDa,本实验为贝类体内PSTs的净化和脱除机制的研究做出一定贡献.